01 焦磷酸测序原理

焦磷酸测序技术是一种准确、定量、简便、快速的核酸序列测定技术。焦磷酸测序反应体系包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶等， 以及5′-磷酰硫酸(APS)、荧光素、待测序DNA单链和测序引物等。引物与模板单链DNA退火后，在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶4种酶协同作用下，将特定的dNTP与单链互补聚合，并释放一次荧光信号。通过检测荧光的释放和强度，达到实时、定量测定DNA序列目的。

图一：焦磷酸反应原理

02 焦磷酸测序主要应用

1.SNP、插入、缺失、CNV等单链多态性研究；

2.DNA甲基化定量测定；

3.病原微生物快速鉴定；

4.其他核酸序列测定等。

03 产品规格及包装

规格：23测试/盒，46测试/盒，100测试/盒，200测试/盒，1000测试/盒。

图2  焦磷酸测序试剂盒

04 产品主要成分

DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶、APS、荧光素、碱基、水等。

05 配套技术平台

试剂应用于武汉菲思特生物科技有限公司PYROSEQ-E16焦磷酸测序仪、凯杰PyroMark Q96 、Q48焦磷酸测序仪等焦磷酸测序仪。

06 样本要求

全血、咽拭子、FFPE样本、体液、各种细胞组织、游离DNA等。

07 简要操作步骤（以菲思特焦磷酸测序仪为例）

1．PCR扩增、单链产物转移至测序管；测序管加入 3uL 测序酶和 3uL 测序底物。

2．取dNTP 排管，依次加入 20μldATPαS、20μl dTTP、20μl dGTP、20μl dCTP。碱基平铺在排管底部。

3．将清洗水槽、dNTP 排管、测序管放入测序仪指定位置。

4．启动测序。

5．测序结束单击“保存”按钮。单击“输出报告”输出基因型结果。

图3 相关试剂、设备例图

图4 检测结果解读示例

08 产品性能指标

准确性：99.95%以上；

重复性：CV≤2%；

测序长度：50bp以上；

最低检出限：0.1%。

菲思特生物聚焦于分子诊断和免疫诊断领域的技术产品开发、生产和市场推广，积极开拓海内外市场，诚邀合作，共谋发展。欢迎更多的合作伙伴就设备及配套试剂展开多样化的合作，菲思特将采取多种优惠政策全面助力各位合作伙伴乘风波浪，共创佳绩！